山龙胆

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抗肿瘤中草药龙胆草 [复制链接]

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龙胆是多年生草本植物,根茎相对较短,根系属须根系,呈密生状态,须根细长,多至数十条,根呈黄白色,长50厘米左右,茎直立单生或丛生,一般每年8~9月间开花,一个多月后结果,种子为褐色条状。

目前国内化妆品植物原料应用的较多的是以提取物形式加入,由于工艺的限制,提取物有效成分含量低,功效无法保证,且提取过程会添加较多醇类,违背了天然原料的初衷。以龙胆草为发酵底物,利用微生物的发酵代谢作用,以龙胆苦苷为评价指标,对龙胆草进行深层次的加工制备成龙胆酵素,为丰富龙胆草资源的化妆品应用及酵素新产品的开发提供理论依据

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|基本信息|

龙胆的根茎及根经过干燥,都可以入药,具有泻肝胆实火的功效。

性味:味苦,性寒。

归经:归肝、胆经。

功效:清热燥湿,泻肝胆火。

主治

用于清热燥湿,泻肝胆火。用于湿热黄疸,阴肿阴痒,带下,湿疹瘙痒,肝火目赤,耳鸣耳聋,胁痛口苦,强中,惊风抽搐。

相关配伍

1、伤寒发狂:草龙胆为末,入鸡子清、白蜜,化凉水服二钱。(《伤寒蕴要》)

2、蛔虫攻心刺痛,吐清水:龙胆一两,去头锉,水二盏,煮一盏,隔宿勿食,平旦顿服之。(《圣惠方》)

|功效成分|

环烯醚萜苷类化合物

龙胆中含有大量的环烯醚萜苷类化合物,其中包含龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、当药苷、马钱苷酸、6′-O-葡萄糖龙胆苦苷、断氧化马钱子苷、2′-(2,3-二羟基苯甲酰)-当药苷、2′-(2,3-二羟基苯甲酰)-龙胆苦苷。冯波首次从龙胆中分离得到8-表马钱子酸、6′-O-βD-吡喃葡萄糖基龙胆苦苷。关皎等从龙胆中鉴定出rindoside、trifloroside。周艳丽等首次从植物中分离得到天目地黄苷A、大花木巴戟苷C、地黄新苷C、6-酮基-8-乙酰钩果草苷、天目地黄苷E、齿叶玄参苷A、6,7-去氢-8-乙酰钩果草苷、地黄新苷B、3′-Oβ-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷。

黄酮类化合物

龙胆中含有多种黄酮类成分,主要有异荭草素、7-O-葡萄糖-异荭草素、4′-O-葡萄糖-异荭草素、异牧荆素、3′-O-葡萄糖-异牧荆素。刘明韬等从龙胆中鉴定出山奈酚。关皎等从龙胆中鉴定出三叶苷、槲皮素。

??酮类化合物

龙胆中含有多种??酮类成分,主要有1,3,7,8-四羟基口山酮、1,3,6,7-四羟基??酮、1,3,7-三羟基-4,8-二甲氧基??酮、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-3,7,8-三羟基??酮。周艳丽等发现acremoxanthoneD、oliganthaxanthoneB、oliganthaxanthoneA、polyhongkongenosideA、sporormielloside、artomandin、pinetoxanthone、1,5-dihydroxy-2,3,4-trimethoxyxanthone、bannaxanthoneⅠ。还有芒果苷等化学成分。

三萜类及其他化合物

龙胆中含有3-O-棕榈酸酯高根二醇、2α-羟基-熊果酸、α-香树素、3-O-乙酰氧基熊果醇、3-O-棕榈酸酯高根二醇、熊果醛、没食子酸乙酯、水杨酸。王薛等研究发现龙胆中含有豆甾醇、熊果酸、齐墩果酸。此外还有龙胆黄碱、龙胆三糖、秦艽乙素、秦艽丙素等。

|药理作用|

保肝作用

崔长旭等研究发现龙胆草水提取物能明显抑制由四氯化碳和D氨基半乳糖所致急性肝细胞坏死大鼠血清中谷丙转氨酶及谷草转氨酶含量的升高,增加血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的含量,降低丙二醛的含量,从而说明龙胆草水提取物对四氯化碳及D氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤具有保护作用。王国英等研究发现龙胆苦苷具有保肝作用。

抗肿瘤作用

郭海凤以小鼠S肉瘤为模型,研究关龙胆乙醇提取物的抗肿瘤作用,研究结果表明关龙胆乙醇提取物具有较好的肿瘤抑制作用。罗明志等研究发现10和0.1μmol/L的龙胆苦苷对人肝癌细胞具有杀伤效应,结果表明龙胆苦苷对异常肝细胞具有杀伤作用。陈雷研究发现龙胆苦苷及其衍生物体外可以抑制人肺腺癌细胞株A的活性。

抗炎镇痛作用

陈雷等采用小鼠醋酸扭体法和热板法研究龙胆苦苷镇痛药理作用,发现龙胆苦苷对急、慢性炎症反应有抑制作用,对热和化学刺激引起的疼痛反应有明显的镇痛作用。陈长勋等研究发现龙胆苦苷对炎症早期渗出具有一定的抑制作用。程渝等研究发现龙胆草水提物对大鼠细菌性和霉菌性阴道炎具有改善作用。

抗病毒及其他作用

田冶等研究发现龙胆水提液的半数中毒浓度为15.25g/L,抑制呼吸道合胞病毒的半数有效浓度为1.07g/L,治疗指数为14.25,且对呼吸道合胞病毒的抑制作用存在明显的量效反应关系(P0.01),结果表明龙胆水提液在海拉细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。此外,龙胆还具有健胃、升血糖、兴奋中枢神经系统、利尿等作用。

|龙胆酵素|

目前,以龙胆草为原料发酵制作酵素的试验研究较少。陶宏兵等以龙胆草为发酵底物,利用微生物的发酵代谢作用,以龙胆苦苷为评价指标,对龙胆草进行深层次的加工制备成龙胆酵素,采用自由基清除和透明质酸酶抑制试验,验证其功效,为丰富龙胆草资源的化妆品应用及酵素新产品的开发提供理论依据。

发酵条件对龙胆酵素中龙胆苦苷含量的影响

为确定龙胆酵素发酵的各个关键参数,选择菌株组合(A)、发酵温度(B)及发酵时间(C),进行3因素3水平L9(33)正交试验,以龙胆苦苷含量作为龙胆酵素发酵工艺参数的评判指标,结果见表1。

表1龙胆酵素发酵工艺优化正交试验结果

菌株组合、发酵温度及发酵时间这3个因素对应的极差(R)为RC>RB>RA,从而得知影响龙胆酵素发酵的主次因素为发酵时间>发酵温度>菌株组合。由极差分析可知,龙胆酵素发酵的最佳方案为A3B2C2,即发酵菌株为酿酒酵母+植物乳杆菌、发酵温度为30℃、发酵时间为72h。在此条件下重复验证3次,结果表明,龙胆酵素的龙胆苦苷含量达(±21)μg/mL,此条件下的酵素营养、抗敏舒缓效果更佳。

龙胆酵素对透明质酸酶的抑制作用

透明质酸酶是能特异性分解透明质酸(HA)的一种蛋白水解酶。HA是构成细胞外和细胞间基质的主要成分,被分解后会引起细胞脱颗粒和介质渗漏,导致速发型过敏反应的发生。

龙胆酵素对透明质酸酶的抑制作用如图1所示。龙胆酵素对透明质酸酶的抑制率随浓度的增加而增加,当龙胆酵素浓度低于5%时,抑制率与浓度呈线性关系,随着浓度的增大而增大。当龙胆酵素浓度高于5%时,抑制率随浓度增加的速率会减慢。当龙胆酵素浓度达到5%时,对透明质酸酶抑制率达89.2%。

龙胆酵素可以抑制透明质酸酶活性,减少HA的分解,具有一定的抗敏止痒的功效。

抗氧化能力

DPPH清除能力

DPPH是一种稳定的氮中心自由基,在nm处有较强吸收值,通常被用来评估检测物质的抗氧化性。IC50指自由基清除率为50%时对应的样品浓度,该值与物质的抗氧化能力呈反比关系。图2为不同浓度的龙胆酵素对DPPH自由基的清除能力。龙胆酵素对DPPH自由基清除率从23.5%上升到77.5%。经计算,龙胆酵素DPPH自由基的IC50为5%。PHILIPPEM等研究表明,发酵物质对自由基清除率表现出差异受原料、微生物和发酵液代谢产物的影响。

·OH和O2-.清除能力

·OH和O2-.是机体再代谢过程中产生的自由基,与机体的衰老有密切关系。图3和图4分别为不同浓度龙胆酵素对·OH和O2-.清除能力的变化趋势。龙胆酵素对·OH的清除率从28.8%上升到70.2%,对·OH的IC50为11%;龙胆酵素对O2-.清除率从7.01%上升到74.1%,对O2-.的IC50为16%。JIANG等研究表明,黄酮类化合物对·OH和O2-.有较好的清除能力,其清除能力取决于芳香环上羟基的数目和位置。

在体外抗氧化能力试验中发现,龙胆酵素的抗氧化活性较好。这可能是因为,在发酵过程中,龙胆酵素本身含有抗氧化成分如Vc等。除此之外,发酵过程中微生物使原料中的功能成分进行转化,多种功能成分的协同作用使其总抗氧化活性增强,但其具体的生理作用仍需进一步的研究。

结论

采用正交实验优化龙胆酵素的发酵工艺,确定最终的发酵工艺为菌株组合酿酒酵母加植物乳杆菌1:1、接种量10%、发酵温度30℃、发酵时间72h。在此优化工艺条件下,发酵液龙胆苦苷含量达到(±21)ug/ml,其透明质酸酶抑制率、DPPH、·OH和O2-·自由基的清除能力能达到89.2%、77.5%、70.2%和74.1%,表明该工艺下发酵液具有很好的抗敏和抗氧化功效,为开发新型龙胆酵素化妆品酵素新产品的开发提供理论依据。

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